Nació el 25 de agosto de 1925 en el barrio de la Macarena en Sevilla. Su padre, Manuel Reina, fue su empresario y representante. Mediante el préstamo de un familiar (125 mil pesetas de los años 40) montó el primer espectáculo para su hija: Los Churrumbeles, con el que Juanita se da a conocer por toda España. Monta un segundo espectáculo para ella buscando a los autores más famosos del momento, Quintero, León y Quiroga, que compusieron las letras de Tabaco y Seda, el nuevo espectáculo se presentó en el teatro Reina Victoria, de Madrid. En 1942 se convierte en una de las principales estrellas de la copla, junto con Lola Flores. Actúa en varios espectáculos de Quintero, León y Quiroga, el trío más destacado dentro de estos años, y de Ochaíta, Valerio y el maestro Solano, el más conocido La España de monsieur Dumas, (Madrid, Teatro Calderon, 1945). De estos años son canciones como Manuela la de Jerez, Compuesta y sin novio, La señorita del acueducto o Los churumbeles, que quedaron para siempre asociadas a su nombre. En 1941 debuta en la pantalla con la película La Blanca Paloma. El cine acrecentó su fama con películas como La Lola se va a Los Puertos y Lola la Piconera, de los hermanos Machado y José María Pemán respectivamente. Mostró una religiosidad devota concentrada en la Virgen de la Macarena y profesó políticamente un conservadurismo a ultranza, simbolizado por su presencia frecuente y entusiasta ante el general Francisco Franco en las fiestas organizadas en el Palacio de Oriente y en los Jardines de la Granja. En los años sesenta comenzó su retirada de los escenarios. Tuvo la culminación de su carrera en el "Azabache" de la Expo de Sevilla de 1992, junto a Rocío Jurado, Nati Mistral, María Vidal e Imperio Argentina. El 15 de junio de 1964 se casó con el bailaor, Federico Casado Algrenti, más conocido como "Caracolillo", y al año siguiente nació su único hijo, Federico Casado Reina. En 1994 el ayuntamiento de Sevilla le dedicó una glorieta en el parque de María Luisa. Juanita Reina falleció el 19 de marzo de 1999 en Sevilla.